与此同时，细胞内钙离子的动态变化是评估 RyRs 功能和杀虫剂作用效果的关键指标。Molecular Devices 的 FlexStation 3 钙离子检测工作站凭借其卓越的检测性能，在这一研究中发挥了不可或缺的作用。
FlexStation 3 能够快速、准确地测量细胞内钙离子浓度的变化，为科学家们提供实时的钙离子动态数据。通过荧光探针技术，
FlexStation 3 可以检测到细胞内钙离子浓度的微小变化，从而反映出 RyRs 通道的活性状态以及杀虫剂对钙离子释放的影响。
在整个研究过程中，特别是在评估不同 RyR 构建体（野生型、嵌合体、突变体）对杀虫剂的敏感性（EC50 值）和验证嵌合体功能方面，Molecular Devices 公司的 FlexStation 3 多功能微孔板检测系统发挥了不可或缺的关键作用（图 1b, 4b）。
研究利用了一种基因编码的内质网钙指示剂（R-CEPIA1er）表达在 HEK293 细胞中。当 RyR 被杀虫剂激活时，内质网中的钙离子释放，导致 R-CEPIA1er 的荧光信号（激发 560nm，发射 610nm）发生特定变化（F/F0 比值下降，反映内质网钙浓度降低）。FlexStation 3 凭借其精确的温控、自动化的液体加样和快速、灵敏的光学检测系统，能够高通量（96 孔板）地实时监测这一荧光动态变化过程（每 10 秒记录一次，持续 300 秒）。这种实时、定量的钙流动力学监测是获得可靠 EC50 值的基础。
FlexStation 3 能够精确地添加不同浓度的杀虫剂（从 nM 到 μM 范围）和对照化合物（如咖啡因），并高灵敏度地捕捉到由低浓度杀虫剂引发的微弱钙信号变化。这对于确定杀虫剂对高敏感性昆虫 RyR（EC50 在 nM 级）和低敏感性哺乳动物 RyR 或抗性突变 RyR（EC50 在 μM 级）的效力差异至关重要。研究显示，FLU 和 TET 对昆虫 RyR (Sf RyR) 的 EC50 分别为 59.3 nM 和 174.5 nM，而对兔 RyR1 的 EC50 则高达 4.5 μM 和 7.6 μM，选择性差异超过 100 倍。嵌合 RyR 成功模拟了昆虫 RyR 的高亲和力（EC50~25-46 nM），而抗性突变则使 EC50 飙升到 μM 级。
在结构研究之前，利用 FlexStation 3 进行的钙流检测首先确认了设计的嵌合 RyR 完全再现了天然昆虫 RyR 对二酰胺类杀虫剂的高亲和力和激活特性，为后续冷冻电镜研究的生物学相关性提供了坚实的功能学基础。同时，该技术也用于确认抗性突变体 RyR 对咖啡因等基础激活剂的反应基本正常，表明突变主要影响杀虫剂特异性结合而非通道基本功能。
