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通过SM pull-down 结合质谱筛选到SM 的特异性结合蛋白后,还需更进一步找到SM 具体和蛋白质的哪些氨基酸特异性结合。
筛选SM 在靶点蛋白上的特异性结合位点,可通过以下方法:
(1)重组靶点蛋白与SM 反应后结合质谱进行分析;
(2)在细胞中过表达靶点蛋白,SM 处理细胞,借助IP(免疫沉淀)富集靶点蛋白,最后进行质谱分析。
筛选到SM 在靶点上的结合位点后,利用定点突变技术对位点进行突变,后续利用重组蛋白或者在细胞中过表达的方式确证这些位点。
样品要求及实验流程:
工作日:09:00-18:00
休息日:10:00-17:00