Visikol 团队开发了几种 3D 细胞培养模型用于重建肝脏内的组织微环境，模拟 NASH 和 NAFLD 的疾病进展。这些模型通过 3D 共聚焦高内涵成像系统（Molecular Devices， ImageXpress Micro Confocal）结合其他方法进行评估，可量化药物能够在多大程度上改善 NASH 中的纤维化进程。
Visikol 团队使用的 ImageXpress Micro Confocal 高内涵成像分析系统。
其中一种用于非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的共培养模型，采用了异质细胞培养成球的模式，将原代人肝细胞（PHH）与原代人肝非实质细胞（NPC）共培养在超低吸附U型底板中，使用标准培养条件持续培养 14 天，让球体直径生长到约 200 μm大小。球体形成后，加入待测化合物预处理并添加 TGF-β 持续诱导 72 小时以产生纤维化。球体形成的第 5 天到第 14 天，通过 FFA（棕榈酸和油酸）诱导出 NASH 样表型。然后收集汇总细胞球，用于各种终点检测，如 RNA 提取、免疫荧光标记、高内涵成像和目标蛋白的 ELISA 检测等。
在成像方面，Visikol 团队使用共聚焦高内涵成像系统结合 Visikol HISTO-M 透明化试剂，可以实现完整三维细胞模型的 3D 成像。MetaXpress 高内涵图像采集和分析软件可采集每个孔板的全景预览图（每个孔中有一个细胞球）。每个球体采集 20 个Z轴层扫数据，平均总厚度为 150 μm~250 μm。生成的图像可显示多种免疫标记的信号，包括 Albumin、Vimentin、CD68、CD31 和 DAPI 等，表示 3D 体外模型中的肝细胞亚型比例与天然人类肝脏中的比例相符。
HepaRG NP 3D 模型用 DAPI（蓝色）标记，从左到右分别为 Albumin（红色；肝细胞）、pan-cytokeratin（绿色；胆管细胞）、CD31（红色；肝内皮细胞）、CD68（绿色；Kupffer 细胞）、Vimentin（黄色；肝星状细胞）（Visikol 官网）。
这种成像模型可使研究人员能够观察到化合物与细胞的相互作用，从而了解化合物在临床试验中可能对人产生的影响，也可揭示模型中细胞活性与化合物之间的关系以及分析模型中形成的瘢痕组织。
Visikol HepaRG 和非实质细胞共培养的 3D 细胞球在用 100 nM TGF-β 诱导纤维化前 1 小时，分别用对照或 ALK-5 抑制剂预处理 48 h。在上述图像中，DAPI 为蓝色，活细胞为绿色，胶原蛋白为红色。对每个 3D 细胞培养模型的胶原蛋白荧光强度和体积进行量化。可以看出，TGF-β 降低了活细胞数量和球体大小，并且沉积了胶原蛋白，而 ALK-5 抑制剂能够部分改善细胞活力和减少胶原蛋白沉积 （Visikol 官网）。
