在生命科学迈向“高清化”的今天，传统10-12色流式已难以满足对免疫异质性的深度解析。最新发表于《STAR Protocols》的一项研究中，比利时鲁汶大学团队借助Sony ID7000TM超高维全光谱细胞分析仪，成功搭建出40色小鼠多组织免疫表型分析方案，一次性捕获从先天到适应性的全部白细胞亚群，为自身免疫、感染及肿瘤研究树立了新标杆。
1.一机解锁40参数：Sony ID7000TM的“光谱魔力”
面对40种荧光染料同时激发-发射的复杂场景，Sony ID7000TM搭载5激光149检测器的全光谱采集系统，以10 nm精度“指纹级”解析每个荧光素的完整光谱。相比传统补偿矩阵，其光谱拆分算法可自动消除组织自发荧光，实现：
超高维识别：从CD4+记忆T到TIM-4+CD206+巨噬亚群，无遗漏；
超低背景：胰腺、肝脏等高自发荧光组织中，仍可清晰分辨Foxp3+Treg；
灵活扩增：作者在文末指出，未来可轻松加入BB660、RB744等新型染料，进一步扩展至45+色。
40c方案试剂列表。
2.从胰腺到肺：多器官标准化方案
研究团队以NOD/ShiLtJ自发性1型糖尿病小鼠为模型，首次在同一实验流程中完成胰腺、肝脏、肺三大代谢与免疫核心器官的白细胞捕获。通过优化胶原酶D+DNase I温和消化，联合40%Percoll富集，单器官样本可稳定获得>1×10^7活细胞，保障稀有亚群（如ILC、组织驻留记忆T）的可靠检测。
图1. 各类白细胞的比例(A) 胰腺。(B) 肺。(C) 肝脏。组织差异：胰腺以T细胞浸润为主；肺含高比例macrophage/neutrophil；肝脏富含DN T、γδ T及NK。每个圆点代表一只独立小鼠的数据；数据汇总自两次独立实验。
3.成本-精度双突破：过夜染色黑科技
传统流式需高抗体量、短孵育时间，而Sony ID7000TM凭借固定后过夜染色策略，将抗体用量降低至常规1/10，并显著提升弱表达marker（如CXCR5、PD-1）的检出率。文中数据显示，16小时染色后信号稳定，为长期队列研究节省大量试剂经费。
固定前染色的试剂列表和用量。
固定后染色的试剂列表和用量。
4.数据驱动的免疫地图
利用Sony ID7000TM输出的高维光谱数据，绘制跨器官免疫细胞“全景地图”，首次发现：
肺特有SiglecF+CD11c+肺泡巨噬群；
胰腺4种TIM-4/CD206组合巨噬亚群与胰岛炎症进展相关；
肝脏富集的γδ T与DN T细胞，提示组织特异性免疫调控网络。
这些发现若用传统流式分步检测，需数十次实验才能完成，而Sony ID7000TM一次上机即可全貌呈现。
图2. 40 色方案所生成数据示例
(A) 整合所有样本后，用 UMAP展示可识别的各类白细胞。
(B) 按器官分组的 UMAP。
(C) 用于区分 cDC1（CD11b⁻ CD103⁺）和 cDC2（CD11b⁺ CD103⁻）的树突状细胞门控策略。
(D) 用于区分胰岛巨噬细胞（TIM4⁻ CD206⁻）及三种外分泌区巨噬细胞亚群（TIM4⁺ CD206⁻、TIM4⁻ CD206⁺、TIM4⁺ CD206⁺）的门控策略。
(E) 胰腺 T 细胞的 UMAP。
(F) 定义不同 T 细胞亚群的 T 细胞标志物表达热图。
写在最后
从40色深度表型到跨器官免疫互作，Sony ID7000TM超高维全光谱细胞分析仪不仅是一台设备，更是连接复杂生物学问题与高精度数据的桥梁。正如作者所言：“Sony ID7000TM光谱流式让研究者第一次在小鼠体内，以单细胞分辨率同时看见先天与适应性免疫的协奏交响。” 在精准医学与系统免疫时代，Sony ID7000TM正成为实验室标配的“全景之眼”。
Reference
Protocol for murine multi-tissue deep immunophenotyping using a 40-color full-spectrum flow cytometry panel
https://doi.org/10.1016/j.xpro.2024.103492
