MG01整体技术流程:
MG01: IP-MS富集试剂盒 (3×DYKDDDDK tag,MS grade),是将Co-IP (免疫共沉淀) 技术和基于质谱的LFQ (Label-free Quantification) 蛋白质相对定量技术无缝整合,实现对蛋白质-蛋白质互作/蛋白质翻译后修饰的高通量发现和筛选的一站式试剂盒。借助MG01试剂盒的优化专业实验流程 (实验参数基本都为用户优化好了,照着流程进行即可),助力用户从基因克隆开始,循序渐进,最终制备出高质量的质谱待检Co-IP蛋白质样品。
用户须使用MG01试剂盒 (PART 1) 所提供的优化3×DYKDDDDK (3×FLAG) 标签进行过表达质粒构建,以匹配MG01试剂盒的使用。
MG01试剂盒可实现对6个质谱级Co-IP蛋白质样品的制备 (PART 2 到 PART 4,可完成3个IP-MS实验项目)。MG01试剂盒最终制备的Co-IP蛋白质样品,无抗体的重链和轻链污染,通过质谱能获得更为丰富的富集蛋白质信息。
通过MG01试剂盒富集的蛋白质样品,再搭配 MG03: Co-IP/Pull-down In-gel Trypsin Digestion (IGD) Kit 或 MG04: Co-IP/Pull-down In-solution Trypsin Digestion (ISD) Kit,实现对Co-IP富集蛋白质样品的质谱前处理,制备高质量的质谱待检肽段,进行质谱检测。
此外,MG01试剂盒的整体流程还提供/推荐了质谱检测:(1) 质谱类型,(2) 质谱检测方式,(3) 质谱数据检索及分析软件等信息和参数。
MG01试剂盒通用性高,适用于Bait蛋白定位于细胞质 (Cytoplasm)、细胞核 (Nucleus)、甚至细胞膜 (single transmembrane protein tested) 的IP-MS样品制备。
MG01试剂盒亦可用于对于质谱筛选到的潜在互作蛋白 (interactors) 的Co-IP+Western blot验证 (或直接用于Co-IP+Western blot互作蛋白检测: Bait蛋白融合FLAG或3×FLAG标签均可)。Bait蛋白使用anti-FLAG-HRP (MG01-9)检测,灵敏度高,无需孵育二抗。潜在互作蛋白(interactors)用直接对应的抗体检测即可。因MG01试剂盒制备的Co-IP样品无抗体的重链和轻链污染,故而在western blot检测潜在互作蛋白(interactors)时:(1) 对潜在interactors的抗体宿主来源无限制(mouse、rabbit、goat等均可),(2) 对分子量接近50kDa (抗体重链) 和 25kDa(抗体轻链)的潜在interactors的检测更有优势。
MG01试剂盒是“闭眼入”的产品,资深专业技术支持,全程为用户开展实验保驾护航。
MG01试剂盒研发是在哺乳动物细胞系中进行的,未对组织样品和模式植物 (如拟南芥、烟草等) 进行测试,但用户可以尝试。用户可与我司技术支持联系沟通。
MG01产品售价:
学术用户 | 商业用户 |
36,900 (元) | 48,900 (元) |
产品采购单:
请用户下载并填写《MG01-产品报价单.xlsx》文件后,发送至market@imultiomics.com。我方收到后,安排沟通并制作合同。
MG01产品采用先付款后发货方式,请用户知悉。
用户自备材料/设备:
请用户参照《MG01-用户自备材料清单.pdf》文档,准备相应的材料/设备,以便顺利开展并完成实验。
MG01产品数据支持:
Co-IP/Pull-down过程中,非特异性粘附蛋白不可避免,这些非特异性粘附蛋白同样会被质谱检测到。质谱级的Co-IP/Pull-down样品制备要求高。如样品制备质量不达标,后续质谱鉴定到的蛋白质可能大部分是高丰度的非特异性粘附蛋白。
综合我司IP-MS技术服务的大数据,此处汇总了MG01试剂盒制备质谱级Co-IP过程中被高频富集的非特异性粘附蛋白列表,供用户参考。
本非特异性粘附蛋白列表,仅 (1) 适合使用MG01试剂盒产品产出的质谱鉴定结果参考 (如用户仅鉴定OE与NC相比的差异条带, 进行手动潜在互作蛋白筛选),(2) 对于其它产品获得的数据,基本无参考价值。
相关产品:
HEK-293T细胞及产品:
利用细胞系结合MG01进行蛋白质-蛋白质互作/后修饰研究的用户,可以使用模式细胞系—HEK-293T细胞。
HEK-293T细胞易于培养,同时能实现高效的瞬转 (Transient Transfection) 和稳转株构建 (Stable cell line),搭配MG01试剂盒可快速开展互作蛋白/后修饰筛选。
我司有HEK-293T细胞系、培养基产品及提供优化的细胞转染流程,详情参见:HEK-293T (适配MG系列产品)
表达质粒构建及western blot (WB) 检测服务:
可提供融合3×FLAG标签的过表达质粒构建和质粒表达水平WB检测服务,以便用户搭配MG01/MG02试剂盒的下游应用。